Посев по коху

Живые палочки Коха

Посев по коху

11 декабря 1843 года родился один из основателей современной микробиологии и первооткрыватель возбудителя туберкулеза Роберт Кох

Е ще великий микробиолог Луи Пастер утверждал, что в скором времени все заразные болезни исчезнут с лица земли. В этом он ошибался. До сих пор, например, туберкулез остаетсяодной из десяти основных причин смерти в мире.

В 2016 году, по данным ВОЗ, туберкулезом заболели 10,4 млн человек (среди них миллион детей), 1,7 млн умерли (среди них 250 тыс. детей).

65% случаев заболевания приходится на семь стран — Индию, Индонезию, Китай, Нигерию, Пакистан, Филиппины и Южную Африку.

Самое большое препятствие в борьбе с инфекцией — лекарственная устойчивость. По данным ВОЗ, среди заболевших около 600 тыс. новых случаев обнаруживали устойчивость к самому эффективному препарату против туберкулеза.

Открывший туберкулезную палочку Роберт Кох, предлагавший масштабную систему мер для профилактики и лечения туберкулеза, не предполагал, насколько живучими и изворотливыми окажутся эти палочки.

Стать корабельным врачом

Роберт Кох родился в городке Клаусталь в Верхнем Гарце в семье горного инженера. В пять лет он самостоятельно научился читать по папиным газетам.

Сейчас этим никого не удивишь, современные дети начинают читать задолго до поступления в школу, а тогда подобные случаи были редкими — они свидетельствовали о таланте и предвещали успех.

Роберт хорошо учился в гимназии, правда, больше внимания уделял естественным наукам, за небрежение к гуманитарным его ругали. А еще юный Кох мечтал о путешествиях, и больше всего ему хотелось стать корабельным врачом.

Окончив гимназию, Роберт поступил в Геттингенский университет, изучать медицину. В то время уже начались дискуссии о том, каким образом развиваются инфекции, и возникла идея, что они могут быть вызваны микробами. Одна из громких публикаций на эту тему была сделана преподавателем Коха профессором Генле.

В 1866 году, получив степень магистра, Кох попадает на шестимесячный курс изучения химии в Берлин, где знакомится со знаменитым Рудольфом Вирховым, одним из основоположников клеточной теории. Молодой Кох очарован наукой, но должен забыть о ней. Его ждет карьера врача.

Сначала он становится ассистентом врача в клинике Гамбурга, потом переезжает в небольшой городок Раквиц. Там он тоже не задерживается и, сдав экзамен на медицинского офицера, отправляется на Франко-прусскую войну.

На фронте бушевали холера и брюшной тиф, и это побудило Коха вновь задуматься о природе заразных болезней.

  В то время уже начались дискуссии о том, каким образом развиваются инфекции, и возникла идея, что они могут быть вызваны микробами

Через год после демобилизации Роберт Кох получает вакансию врача в Вольштейне, в Восточной Пруссии, где и поселяется с женой Эммой, которая дала согласие выйти за него замуж только при условии, что Роберт выкинет из головы свои бредни о дальних странах, будет вести спокойную жизнь врача и отца семейства. Так и произошло. Он принимал больных и ездил к ним по деревням. И всегда расстраивался, если не мог помочь человеку только из-за того, что никто не знал причин заболеваний, в частности инфекционных.

Эта штука его развлечет

Наверное, Кох не смирился со своей ролью тихого, почти деревенского лекаря, потому что часто впадал в депрессию. На день рождения Эмма подарила ему микроскоп — в качестве игрушки, полагая, что эта штука хоть немного его развлечет. Знала бы она, чем это обернется! Муж увлекся не на шутку, он рассматривал под микроскопом все, что попадалось под руку.

Кох с подарком жены, перевернувшим его жизнь

Иллюстрация: Gettyimages

В это время в соседних деревнях главной проблемой была гибель скота от сибирской язвы. Кох решил рассмотреть под микроскопом кровь погибших животных. Он вглядывался в нее и кроме кровяных телец видел какие-то палочки и ниточки.

Если это микробы, задумывался Кох (а он все больше в этом уверялся, потому что в крови здоровых коров никаких палочек и ниточек не наблюдал), то почему они неподвижны? Они же должны активничать, размножаться, причем быстро! Его захватил азарт исследователя. А ведь из всей техники у него был почти игрушечный микроскоп — и больше ничего.

Ничего из того, чем были обеспечены настоящие ученые в университетских лабораториях и клиниках. Не было даже пипеток и шприцев в количестве, необходимом экспериментатору. Роберт использовал вместо них очищенную палочку, чтобы с ее помощью вносить капли зараженной сибирской язвой печени коровы подопытной мышке. Мышки как раз имелись в изобилии.

Первая же мышка после заражения откинула лапки на следующее утро. Вскрыв ее, Кох обнаружил в ее селезенке знакомые палочки и ниточки. Все такие же неподвижные. Кстати, эти палочки сибирской язвы ученые видели и до него. Но дальше никто не пошел. Пошел Кох. Он лихорадочно думал, как же ему подсмотреть активность палочек.

Поскольку, по его мнению, микробы могли расти в живой среде, он поместил кусочки селезенки в водянистую среду из бычьего глаза. Чтобы поддерживать на стеклышке температуру, близкую к живой, он соорудил подобие термостата, использовав масляную лампу.

Ночью, встав, чтобы проверить лампу, он пристально вгляделся в стеклышки — и был очень возбужден, хотя быстро разочаровался: на стеклышке в большом количестве плодились какие-то другие микробы, из-за которых сибирские палочки практически не были видны.

  Из всей техники у него был почти игрушечный микроскоп — и больше ничего. Ничего из того, чем были обеспечены настоящие ученые в университетских лабораториях и клиниках

Его мысль билась как бешеная: как отделить палочки от других микробов и проделать чистый опыт? Решение не могло не прийти: он сделал устройство из двух стеклышек, верхнее было с небольшим куполом. Края стеклышек смазал вазелином для герметичности.

Кох перевернул стеклышки, и капля раствора бычьего глаза с кусочком селезенки обратилась в повисшую каплю в герметичном крошечном сосуде. Другим микробам вход был закрыт. До боли в глазах и стараясь почти не дышать, он наблюдал за каплей.

Час, другой, ничего не происходит… И вдруг палочки и ниточки задвигались и стали расти в размерах и в количестве. Кох в изнеможении выдохнул.

Так в квартире врача заштатного городка рождался великий исследователь микробиологии. Эмма была в отчаянии. Роберт все больше отдалялся от отвлекавших его пациентов, все меньше получал дохода, досадовал на все, что отвлекало его от микроскопа и экспериментов.

Охота на капитана смерти

Кох не только выделил палочки сибирской язвы, он подробно описал их жизненный цикл и задокументировал свои опыты. Он своими глазами увидел, как образуются споры и потом превращаются в палочки и нити.

Так он решил загадку «проклятых лугов», где дохли коровы и овцы: выяснилось, что не только от животного к животному могли перебираться микробы, но и через споры, которые могли поджидать жертву где угодно. С этой работой он отправился в Университет Бреслау и там доложил о своем открытии.

Среди восхищенных слушателей был и будущий основоположник химиотерапии, иммунолог-нобелиат Пауль Эрлих. Работой Коха были весьма впечатлены известные ученые университета Фердинанд Кон и Юлиус Конгейм, и в 1876 году они опубликовали работу Коха в ботаническом журнале.

Кох сразу стал известным. Тем не менее он продолжал работать в Вольштейне еще четыре года, совершенствуя методы фиксации, окрашивания, фотографирования бактерий и продолжая описание заболеваний, вызванных бактериальными инфекциями. Лишь в 1880 году его переводят в Берлин одним из руководителей Королевского управления здравоохранения и дают ему лабораторию и двух ассистентов.

Роберт Кох в Берлине объявил своим врагом номер один чахотку, туберкулез, который называли капитаном смерти. В Германии от него умирало много людей, и о природе болезни почти ничего не знали.

Многие врачи считали туберкулез наследственным заболеванием. Знаменитый Вирхов не признавал инфекционной природы болезни. Когда кто-то только заикнулся, что оно может быть микробным, ему быстро заткнули рот.

Все пасовали перед авторитетом Вирхова.

  Роберт Кох в Берлине объявил своим врагом номер один чахотку, туберкулез, который называли капитаном смерти. В Германии от него умирало много людей, и о природе болезни почти ничего не знали. Многие врачи считали туберкулез наследственным заболеванием

Кох с помощниками увлеченно работал в своей берлинской лаборатории. Вопреки дискуссиям об универсальных микробах он утверждал, что каждый микроб дает свою болезнь. Однажды на срезе вареного картофельного ломтика он увидел несколько разноцветных капелек, начал рассматривать по отдельности содержимое разных капелек и увидел в них разных микробов.

Эврика! Кажется, он открыл способ выращивать чистую культуру бацилл. В жидкой среде они все перемешивались, а на твердой поверхности каждая образовывала свою колонию. С этим открытием он не без робости пошел к Вирхову. Тот выслушал его холодно и снисходительно, заметив, что вряд ли это возможно, скорее для каждого микроба нужно выстроить отдельную лабораторию.

Но Кох уже был достаточно уверен в себе, чтобы не поддаться пессимизму Вирхова, он продолжил исследования, стремясь заполучить чахоточного злодея. Сравнительно недавно он наблюдал, как профессор Конгейм в Бреслау заражал животных чахоткой, просто пересаживая в глаз больные ткани.

Кох решил пересадить больные ткани недавно умершего от чахотки рабочего, будто усеянные серовато-желтыми бугорками, лабораторным кроликам и морским свинкам. Он ждал результата, а в это время пытался высмотреть в этих тканях бацилл.

Он окрашивал их в разные краски, и лишь синяя подарила ему прекрасную картину: он ясно увидел на стеклышке скопления маленьких как бы изогнутых палочек, окрашенных в синий цвет. Он проделывал все больше и больше окрашиваний и каждый раз видел синих червячков. По ходу дела заболевали его подопытные кролики и свинки, пока все не погибли.

Кох препарировал их и обнаружил синие палочки. Он тут же продемонстрировал их своим ассистентам, которые восторженно стали поздравлять его с открытием возбудителя туберкулеза. Еще рано, приговаривал Кох, и продолжал опыты с еще большим жаром и методичностью.

Посев бацилл туберкулеза в пробирке по методу Коха (рис. 7–8 ). На рис. 11 — палочки Коха под микроскопом

Иллюстрация: Gettyimages

Он бегал по всем анатомичкам, где брал образцы тканей людей, умерших от чахотки, и пытался снова пересаживать их животным, а также выращивать чистую культуру. Животные заболевали, а вот в бульонном желатине бациллы размножаться никак не хотели. Шло время, у исследователя ничего не получалось.

Он фанатично продолжал. Пришла в голову мысль, что, раз эти бациллы такие нежные, нужно придумать среду, которая будет максимально похожа на среду организма. И он сделал ее из сыворотки крови, раздобыв ее на бойне. Пробирки расположил определенным образом, под наклоном. Посеял.

И на пятнадцатый день томительного ожидания наконец увидел в желе пробирок нечто похожее на чешуйки. Спешно рассмотрев их под микроскопом, он увидел мириады знакомых палочек. Оставалось впрыснуть эти бациллы здоровым животным.

Он впрыскивал культуру не только кроликам и морским свинкам, но и мышам, крысам, лягушкам и даже аквариумной рыбке. И снова ждал. Рыбке и лягушке все было нипочем, другие животные умирали. Кох решил усложнить эксперимент.

Он понимал, что люди заражаются из-за бацилл, попадающих к ним из мокроты больных или из кашлевых капелек. Ученый решил распылить микробы на животных, для чего построил специальный ящик и подвел к нему трубку. Авантюрный эксперимент. Но он удался.

В 1882 году на заседании физиологического общества в Берлине Кох доложил о своем открытии возбудителя туберкулеза. «Теперь мы можем бороться с этим бичом человечества», — заключил он. А наутро весть разлетелась по всему миру.

Коха тянули во все стороны — на семинары, конференции, парадные обеды; он же стремился с головой уйти в опыты. Его метод выращивания микробов на твердой среде был настолько успешным, что «он тряс это волшебное дерево, — как выразился много лет спустя один из его ассистентов Георг Гаффки, — и открытия дождем сыпались к нему на колени».

  Его метод выращивания микробов на твердой среде был настолько успешным, что «он тряс это волшебное дерево, — как выразился много лет спустя один из его ассистентов Георг Гаффки, — и открытия дождем сыпались к нему на колени»

В 1883 году в Европу пришла азиатская холера. Люди умирали в мучительных судорогах. Кох и его ассистенты без конца вскрывали трупы умерших и впрыскивали зараженные ткани животным. В погоню за микробом включился Луи Пастер.

Но пока ни Коху, ни Пастеру не удавалось его изловить. Эпидемия тем временем шла на спад. От холеры умер один из французских исследователей, и Кох, забрав образцы, уехал в Берлин после его похорон.

В образцах он нашел бациллу, похожую на запятую, о чем подал рапорт министру здравоохранения с просьбой послать его в Индию, «где холера никогда не прекращается, дабы я мог закончить там свои изыскания по этому вопросу».

Роберт Кох уехал в Калькутту, где находил во вскрываемых трупах все больше запятых. С присущей ему методичностью он смог вырастить чистую культуру и описать злодея.

Кох все-таки попутешествовал — в Египет, Южную Африку и Индию, гоняясь за распространителями чумы, малярии, сонной болезни. Он был победителем. Но когда исследователь взялся за создание лекарства против чахотки в виде туберкулина, он поспешил, и его ждала неудача. Туберкулин был почти неэффективен и вызывал ужасные аллергические реакции.

Впрочем, позже туберкулин все же взял свое, правда, в виде теста, диагностирующего туберкулез. Позже тест был назван по имени Манту, который стал вводить его подкожно. Видимо, в эти непростые для Коха времена произошла его встреча с Ильей Мечниковым. С будущим русским гением Кох обошелся так же, как когда-то с ним самим Вирхов: холодно и раздраженно, о чем вспоминал Мечников.

Правда, о «позднем» Кохе Мечников говорил уважительно.

Несмотря на неудачу с туберкулином, Кох много усилий приложил к пропаганде необходимой гигиены, налаживанию лечения чахоточных больных в клиниках и санаториях и оказанию помощи бедным семьям.

В 1905 году Роберту Коху была присуждена Нобелевская премия за «исследования и открытия, касающиеся лечения туберкулеза». Он снова много работал. Последний доклад по туберкулезу он сделал в 1909 году. А годом позже Роберт Кох умер от инфаркта миокарда.

Источник: https://stimul.online/articles/science-and-technology/zhivye-palochki-kokha/

Глубинный посев микроорганизмов

Посев по коху

Подготовка к анализу

1. Степень разведения навески продукта.

1.1. Степень разведения навески продукта для посева на плотные среды выбирают так, чтобы общее количество колоний, выросших нa чашке Петри, колебалось в пределах 15—300; количество колоний специфических групп бактерий (например, колиформных) – 15-150; плесеней 5-50.

1.2. Степень разведения навески продукта для посева в жидкие среды выбирают так, чтобы хотя бы в одной пробирке наибольшего разведения отсутствовали микроорганизмы.

Количество продукта, которое необходимо профильтровать для получения изолированных колоний на фильтре, должно быть указано в нормативно-технической документации на методы анализа соответствующих групп, свойств, родов или видов микроорганизмов.

2. Объем навески продукта или его разведения для посева.

2.1. При посеве глубинным методом 1 см 3 жидкого продукта или разведения навески продукта смешивают с расплавленной питательной средой.

2.2. При посеве поверхностным методом 0,1 или 0,2 см 3 жидкого продукта или разведения навески продукта вносят на поверхность плотной среды.

2.3. Для выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов и определения их таксономических свойств в жидкие среды вносят до 50 г (см 3 ) продукта; при определении количества микроорганизмов в жидкие среды вносят до 100 см 3 жидкого продукта или разведения навески.

Проведение анализа

Глубинный метод посева в плотные среды

1.1. Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры 45±1 о С питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4-5 мм.

1.2. Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязняла крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат.

Поверхностный метод посева на плотные среды

2.1.Среду наливают в чашку Петри и после застывания подсушивают. При подсушивании для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48-50 о C или в ламинарном боксе 1-2 ч, или в других условиях, обеспечивающих испарение конденсационной влаги и исключающих микробное загрязнение.

2.2.На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и немедленно равномерно растирают по поверхности шпателем – изогнутой стеклянной палочкой.

2.3.Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения:Да какие ж вы математики, если запаролиться нормально не можете. 8392 — | 7310 — или читать все.

91.146.8.87 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

Посе́в (бакпосев) — один из стационарных методов культивирования микроорганизмов на питательных средах, применяемый для культуральной диагностики в медицинской микробиологии, а также для исследования биохимических и биологических свойств в различных биотехнологических целях.

В зависимости от содержания исследуемых бактерий в образце, проводят посев на плотные питательные среды (для получения изолированных колоний и определения чистоты культуры). Если в исследуемом материале содержание микроорганизмов незначительное, то посев проводят на жидкие среды обогащения.

Различают различные методы посева [1] .

Простые [ править | править код ]

  • мясо-пептонный бульон (МПБ) — жидкая среда
  • мясо-пептонный агар (МПА) — плотная среда

Специальные [ править | править код ]

Специальные методы характеризуются добавлением специфического компонента или заменой основы.

  • казеиново-угольный агар
  • сывороточный агар
  • кровяной бульон
  • яичная среда Лёвенштейна-Йенсена

Элективные [ править | править код ]

Элективные методы характеризуются получением роста только интересующего микроорганизма.

  • желточно-солевой агар (ЖСА) — для стафилококка
  • пептонная вода (1 %,pH=8) — для холерного вибриона
  • щелочной агар
  • среда Мюллера — для сальмонелл
  • селенитовая среда — для сальмонелл
  • среда Лёффлера — эффективна для коринебактерий дифтерии

Дифференциально-диагностические [ править | править код ]

Позволяют произвести идентификацию отдельных типов, видов и групп бактерий.

  • среды Гисса («пёстрый ряд»)
  • среда Сабуро — с добавлением антибиотика

Техника посева [ править | править код ]

Для посевов [2] применяют микробиологические петли, реже — иглы и шпатели. Чаще всего для культивирования используются пробирка и чашка Петри. Универсальным инструментом для засева культуры является бактериальная петля.

Помимо неё, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели.

Для посевов жидких материалов наряду с петлёй используются градуированная и пастеровская пипетки.

Посев на плотные питательные среды (в пробирке) [ править | править код ]

При посеве берут пробирку в левую руку, а правой, плотно обхватив пробку четвёртым и пятым пальцами, вынимают её. Удерживая другими пальцами той же руки петлю, сначала в горизонтальном, а потом в вертикальном положении её вносят в открытое пламя и прожигают до красного каления.

Остывшей петлёй набирают посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой, предварительно проведя край пробирки над пламенем спиртовки. Пробку при этом обжигать не следует.

Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская её до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют материал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают её пробкой.

Петлю фламбируют в пламени горелки и ставят в штатив рукояткой вниз. Пробирки с посевами подписывают заранее, указывая дату посева, номер исследования и название культуры.

Посев на плотные питательные среды (в чашке Петри) [ править | править код ]

Посевы «газоном» производят на плотную питательную среду в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлёй или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара по методу Дригальского.

После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий с разделением их на колонии.

Идентификацию выделенных бактериальных культур проводят путём изучения морфологии бактерий, их культуральных, биохимических и других признаков, присущих каждому виду.

Источник: https://vsedlyavasdamy.ru/info/glubinnyj-posev-mikroorganizmov/

Выделение чистой культуры бактерий: идентификация аэробов и анаэробов

Посев по коху

Чистой культурой считается совокупность микроорганизмов, принадлежащих к одному виду. Получение данного материала является необходимым моментом исследования в выполнении лабораторных диагностических методик.

Для выделения чистых культур бактерий используют мазки из крови, мокроты, фекалий, исследуют гнойный, а также другой биологический материал.

В естественных условиях (в воздухе, воде, почве), продуктах пищевого назначения, в трупах (человеческих, животных) содержатся ассоциации различных видов микроорганизмов.

Отделение чистой культуры важно для подробного изучения свойств микробов: морфологических, культуральных, биохимических, а также антигенных. По результатам данных методик исследования можно установить принадлежность возбудителя к определенному виду и типу, иными словами, выполнить его идентификацию.

Свойства микроорганизмов, учитываемые при выделении культуры

Принципы биологического разъединения бактерий подразумевают учет особенностей жизнедеятельности микробов с целью выбрать наиболее оптимальные методы исследования. Выбранные методы должны соответствовать возбудителю по определенным параметрам.

  1. Тип дыхания. Среди бактерий выделяют группы аэробных и анаэробных представителей. Для получения анаэробных микробов материал для исследования прогревают. Следующий этап – культивирование микроба в анаэробных условиях. Методики получения аэробных и анаэробных бактерий различны.
  2. Спорообразование. Способность некоторых бактерий к спорообразованию обеспечивает защиту и сохранность микроорганизмов.
  3. Устойчивость бактерий к агрессивному воздействию щелочей и кислот. Устойчивость некоторых видов бактерий к данным веществам обеспечивает максимальное очищение исследуемого материала от примеси других бактерий с применением растворов щелочи либо кислоты.
  4. Подвижность бактериальных организмов. Для отделения чистой культуры подвижных микроорганизмов используются методы отделения культур микробов в капле конденсата.
  5. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам, некоторым химическим веществам и другим антимикробным средствам. Для некоторых возбудителей наиболее предпочтительны методы выделения культур с применением селективных (специфических) питательных сред.
  6. Антибиотики. Очищают материал от дополнительных микроорганизмов.
  7. Способность бактерий проникать сквозь неповрежденные кожные покровы. Это свойство присуще некоторым разновидностям, которые обладают факторами агрессии.
  8. Чувствительность животных к некоторым болезням инфекционного генеза.

Методики проведения оценки возбудителя

Для получения чистых культур бактериальных клеток применяется ряд методов. Каждый из них применяется в той или иной ситуации и имеет последовательные четкие этапы получения колоний возбудителя заболевания. Рассмотрим наиболее популярные.

Методика Пастера

Представляет собой разведение чистых культур в среде для бактериального роста (жидкой консистенции) до получения концентрации с 1 клеткой на объем жидкости. Данный метод выделения имеет важнейшее историческое значение.

Методика Коха

Известна также как методика «пластинчатых разводок». Представляет собой разведение материала для исследования в агаре (в расплавленном состоянии с температурой 48-50°С). Далее полученный состав разливают по чашкам Петри, где он должен застыть.

Посевы обычно проводят с 3-4 последних разведений, так как бактерий там уже мало.

Таким образом, при росте микробов на питательной среде проявляются обособленные колонии микроорганизмов, которые рождаются из единственной материнской клетки.

Затем из глубины агара можно выбрать изолированную колонию, и пересеять ее на свежую питательную среду. Следующий этап – идентификация и выделение возбудителя.

Методика Шукевича

Используется при необходимости выделить чистую культуру аэробов протея либо каких-либо других микробов, характеризующихся «ползучим» ростом. Сеют культуры на воду, конденсированную у основания скошенного агара.

При данном методе отделения чистой культуры подвижные клеточные организмы (протей) поднимаются на верхушку скошенного агара, а неподвижные формы не меняют своего расположения на среде посева. Путем пересевания верхних краев проросшей культуры, можно вывести чистую бактериальную культуру.

Методика Дригальского

Способ Дригальского довольно широко используется в исследовании биологического материала путем разведения культур в пробирке с бульоном либо с физиологическим раствором.

Следующий этап: одну каплю полученного раствора при помощи стерильного шпателя из стекла распределяют равномерно по поверхности среды питания в 1-ой чашке. Потом, не прожигая шпатель на огне, делают им же посев на 2-ой и 3-ей чаше.

Суть метода Дригальского заключается в том, что с каждым последующим посевом культур концентрация бактерий (аэробов) все меньше. На 3-ей чашке они распределяются довольно обособленно, каждая бактериальная клетка при этом дает клональные клетки (в виде изолированной колонии).

Их пересевают на скошенный агар для накопления возбудителей.

Методика Вейнберга

Определенные затруднения вызывает выделение чистых культур анаэробных возбудителей, если микроорганизмы не гибнут при контакте с кислородными молекулами.

Суть методики заключается в выведении анаэробных микробов (в составе материала) в слегка остывшей (45-50°С) расплавленной среде питания (агарозированной). Проводят 6-10 разведений.

Затем идет следующий этап: необходимо быстро охладить состав в пробирке и залить ее поверхность смесью из масла вазелина и парафина, что препятствует проникновению воздуха и способствует развитию анаэробных условий.

При благоприятном посеве прорастают изолированные колонии на второй день, которые можно извлечь из пробирки путем ее нагревания при помощи горелки. Из разрезанного агарового столбика петлей набирают культуры для дальнейшего исследования. Полученные колонии размещают в жидкую питательную среду, на чем этапы выделения колонии анаэробных возбудителей можно завершить.

Методика Хангейта

Ее часто применяют для выделения аэробных микробов, обладающих высокой кислородочувствительностью. В проведении такого выделения культуры аэробов применяется методика вращения пробирок.

Методы засевания аэробных бактерий предполагают выведение их на агаризированной расплавленной среде. Наличие инертного газа в пробирке дает возможность вырастить изолированные колонны аэробных бактерий таким образом, что выделенные культуры аэробов хорошо можно увидеть даже невооруженным глазом на 2-3 день.

Микроманипулятор

Это методика выделения отдельных бактериальных клеток путем применения микроманипулятора. Микроманипулятор представляет собой специальный прибор, которым можно выловить из суспензии одну клетку, а также обеспечить возможность посева культуры в пробирку.

Дальнейшая идентификация возбудителя проводится с учетом всех перечисленных свойств возбудителя (аэробов и анаэробов), а также особенностей их взаимодействия с различными веществами.

Метод Дригальского: этапы выделения чистой культуры и ее идентификации

Работаю врачом ветеринарной медицины. Увлекаюсь бальными танцами, спортом и йогой. В приоритет ставлю личностное развитие и освоение духовных практик. Любимые темы: ветеринария, биология, строительство, ремонт, путешествия. Табу: юриспруденция, политика, IT-технологии и компьютерные игры.

Источник: https://probakterii.ru/prokaryotes/raznoe/vydelenie-chistoj-kultury-bakterij.html

Вылечим любую болезнь
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: